在很高的地方（比如高原），空气稀薄，氧气不够，这会导致身体里的血液流动方式发生不正常的加速变化，还会破坏眼睛里一个叫做“血-视网膜屏障”（BRB）的重要保护层。
这种破坏会让血管里的液体漏出来，引起一种叫做“血管源性水肿”的肿胀。目前，对于这种情况，有效的治疗方法还不多。
这项研究就是想看看，一种叫做“烟酰胺单核苷酸”（NMN）的物质，能不能保护眼睛的BRB屏障，让它在高海拔缺氧的情况下不容易被破坏。同时，研究者也想搞清楚，NMN是通过细胞里哪些微小的分子变化（分子机制）来起到保护作用的。
当身体里氧气不够（缺氧）的情况变得更严重时，会导致细胞里一种叫做“细胞色素”的东西变得黏糊糊的，更容易粘在一起。同时，血管壁细胞上一种叫“VE-钙粘蛋白”（你可以想象成细胞之间的一种“胶水”）的结构会发生一种叫做“磷酸化”的明显化学变化。这两个情况加起来，就会导致眼睛里一个重要的保护层（叫做血-视网膜屏障，简称BRB）变得更容易“漏水”，也就是通透性大大增加了。
通过在实验室（体外）和在生物体内（体内）做的实验都表明，一种叫做NMN的物质，能够帮助血管壁细胞减少“漏水”的情况（降低通透性）。
此外，NMN还通过其他方式来保护血管壁这个屏障：它可以调节血管壁细胞里一种叫做“活性氧”（ROS）的有害物质的数量，阻止一种叫“Src”的分子被“激活”（也就是发生磷酸化），并且抑制接下来发生的一连串叫做“Pi3k/Akt”的信号反应。
方法：
- 模拟高原损伤： 为了研究高原缺氧对眼睛保护层（BRB）的影响，科学家们先是弄了一个能模仿高原上空气稀薄、氧气少环境的特殊“箱子”（模拟高原环境舱）。他们把小鼠放进这个箱子里，让小鼠眼睛里的重要保护层（BRB）受到损伤，这样就建立了一个可以研究的模型。
- 检查血管漏水情况： 他们用一种叫“伊文思蓝”的蓝色染料给小鼠注射，然后观察这种染料会不会从小鼠的血管里漏出来。漏得越多，就说明血管（也就是BRB屏障）的通透性增加了，受损更厉害。
- 检查细胞活力： 他们还用了一种叫做“WST-8”的测试方法，来测量细胞是不是还健康、有活力。（这种测试与细胞内一种重要的能量相关分子NAD+有关）。
- 体外细胞实验： 另外，他们还在实验室里培养了一种从人的脐带血管里取出来的特殊细胞（叫做HUVECs，是血管内壁细胞的一种）。他们把这些细胞也放在氧气很少的“低氧室”里培养。
- 检测细胞层通透性： 当这些细胞长成一层紧密的“细胞墙”（融合单层）后，科学家们就用一种带着荧光标记的、像糖一样的物质（FITC-葡聚糖），看它能不能穿过这层“细胞墙”。能穿过去的越多，说明这层细胞墙越“漏水”（通透性高）。
- NMN干预对比： 上面这些在细胞上做的实验（比如检测通透性、后面提到的各种检测），科学家们都分成了两组：一组在培养时加入了NMN这种物质，另一组没加，这样就能对比NMN有没有保护作用。
- 分析“细胞胶水”蛋白： 为了搞清楚NMN是怎么起作用的，他们用了两种技术：一种叫“蛋白质印迹”（Western Blot，可以检测特定蛋白质多不多），另一种叫“免疫荧光”（用带颜色的标记来看蛋白质在细胞的哪个位置）。用这些技术来分析细胞和细胞连接处的那种“胶水蛋白”（VE-钙粘蛋白）的数量（表达）有没有变化，或者有没有发生一种叫“磷酸化”的化学改变（磷酸化通常会影响蛋白质的功能）。
- 评估细胞死亡： 他们还用了其他方法，比如“TUNEL染色”（能给快要死掉的细胞染上颜色）或者“流式细胞术”（一种能快速分析大量细胞的机器），来评估有多少细胞因为缺氧等原因正在死亡（这个过程叫“凋亡”）。
- 观察有害物质ROS： 科学家们用了一些特殊的化学“探针”（像DCFH-DA、MitoSOX、DHE这些），这些探针碰到细胞里一种叫“活性氧”（ROS）的有害物质时会发光，这样就能知道细胞里ROS的水平高不高了。
- 测量DNA损伤： 他们还用了一种特别的染色方法（叫“8-氧代鸟嘌呤免疫染色”），这种方法能专门标记出细胞的遗传物质（DNA）被ROS损伤的地方，以此来测量DNA损伤的程度。
- 分析信号通路激活情况： 最后，他们又用“蛋白质印迹”技术，检测了之前结果里提到的那条重要的细胞内信号通路（Src/Pi3k/Akt通路）中的几个关键分子。他们主要看这些分子的“磷酸化”水平怎么样，因为磷酸化通常意味着这个信号分子被激活了，从而了解这条信号通路是不是因为缺氧而过度活跃了。
结论： 这些研究结果弄清楚了NMN是如何保护血管壁屏障的，特别是解释了NMN和那种由“活性氧”（ROS）引发的“Src/Pi3k/Akt”信号活动过头了（过载）是如何影响这个屏障的保护作用的。同时，这些发现也指明了未来可能用什么方法（潜在的治疗策略），来防止因为缺氧导致眼睛的保护层（BRB）“漏水”。